1. 細胞來源
NK-92（Natural killer-92 cells）是一種永生化的自然殺傷細胞，最初是從一位50歲男性患者的外周血中分離而來，他患有急性非霍奇金淋巴瘤—一種起源于淋巴組織的惡性腫瘤，由發(fā)現(xiàn)該疾病的醫(yī)師“托馬斯·霍奇金”的姓氏命名。細胞懸浮生長，呈現(xiàn)聚團狀。
作為一種永生化的免疫細胞，NK-92對多種白血病、淋巴瘤和骨髓瘤細胞系具有殺傷作用，廣泛應(yīng)用于抗腫瘤治療以及針對細胞殺傷活性和特異性的基因工程改造等研究中。
2. 生長特性
A. NK-92為懸浮細胞，細胞圓亮，喜聚團生長，聚團越多，細胞活力越好。
B. 細胞生長依賴于IL-2，若培養(yǎng)液中缺少IL-2，細胞很容易死亡。
C. 細胞對離心力較為敏感，高速離心會影響細胞生長狀態(tài)。
NK-92（貨號：C5225）
3. 培養(yǎng)細節(jié)
A. 復(fù)蘇
復(fù)蘇初期，細胞松散且活力欠佳，可“豎瓶培養(yǎng)”以增加細胞局部密度，在復(fù)蘇后的24h內(nèi)盡量不要晃動或移動細胞。24h后可向培養(yǎng)瓶中補加適量新鮮培養(yǎng)液，待細胞密度上來后再橫瓶靜置培養(yǎng)。
B. 傳代
該細胞推薦傳代比例為1∶2-1∶3。當(dāng)細胞密度達到80%以上時，可根據(jù)培養(yǎng)基的顏色選用直接分瓶傳代（培養(yǎng)基顏色偏紅）或收集細胞離心后再傳代（培養(yǎng)基顏色偏黃）。
C. 換液
培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基顏色變黃但細胞密度不到80%、鏡下觀察細胞團數(shù)量不多時，要及時補液（以維持細胞所需營養(yǎng)）。
由于NK-92細胞對離心較為敏感，還可采用“半換液法”：換液前將細胞瓶豎瓶靜置15-30min左右，待細胞完全沉淀下來后，小心吸取上層培養(yǎng)基后棄掉，再補加適量新鮮培養(yǎng)液。
D. 凍存
NK-92細胞對于凍存技術(shù)要求較高，凍存前細胞活力要高于90%，且細胞圓亮，狀態(tài)良好，處于對數(shù)生長期；離心后要輕柔吹散混勻，避免用力過大導(dǎo)致 細胞膜破裂，影響細胞活率。推薦使用9:1的凍存液比例進行凍存（90%FBS+10%DMSO），且細胞凍存數(shù)量最好高于2*10^6/mL。
——注意——
該細胞生長依賴于IL-2。IL-2不僅能促進NK細胞的增殖，還能增強細胞的溶解活性。IL-2容易降解，配制好的完全培養(yǎng)基注意及時分裝并保存于4℃，盡量兩周內(nèi)用完。
Q & A
A 細胞成團時是否需要吹散？
NK-92細胞本身偏向于聚團生長，相較于松散細胞，聚團的細胞活性更高。對于不是特別大的細胞團則無需吹散，當(dāng)細胞團過大時，為了防止中間細胞因汲取營養(yǎng)不足導(dǎo)致細胞死亡，輕柔吹散細胞團即可。
B 培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)松散的細胞間隙有黑色顆粒怎么處理？
培養(yǎng)基中黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產(chǎn)物，一般不會影響細胞的生長狀態(tài)。當(dāng)培養(yǎng)液中黑色顆粒較多時，可通過800-1000/rpm離心3 min去除。
C 實驗操作規(guī)范，培養(yǎng)兩三天后細胞狀態(tài)仍不佳且不增殖是什么原因？
這種情況就要考慮是不是培養(yǎng)基的原因了，培養(yǎng)基中IL-2很不穩(wěn)定，若培養(yǎng)基放置的時間過久，IL-2的降解會導(dǎo)致細胞增殖速度變緩甚至細胞死亡。當(dāng)細胞狀態(tài)不佳或者不增殖時，可額外向培養(yǎng)基中按照200U/mL補加IL-2。
