| 適用范圍 | 試劑 |
|---|---|
| 使用方法 | 細胞傳代： 1. 37℃水浴預熱 CHO 無血清完全培養基； 2. 從培養箱中取出搖瓶，取少量細胞懸液進行細胞密度及活力檢測； 3. 按照密度為3-5×105/ml個細胞接種至新的搖瓶中，置于37℃、CO2含量為5%-8%的培養箱中，搖床( 振幅50mm,轉速110-120rpm）上培養。 4. 當活細胞密度≥4×106時進行傳代，使用新鮮CHO無血清培養基按3-5×105/ml重懸細胞，并將細胞接種至新搖瓶。 培養基適應（大部分情況不需要）： 直接適應 1. 將細胞直接稀釋到預熱的CHO培養基中，活細胞密度為3-5×105/ml，轉移到合適的培養容器中。 2. 置于培養箱，監測細胞生長情況。如果使用直接適應法觀察到細胞生長不理想，則使用順序適應法。 順序適應 1. 細胞以3-5×105/ml 的密度接種至含1/3 CHO無血清培養基和2/3原培養基的培養瓶中，置于37℃、5%-8% CO2培養箱中培養。 2. 當細胞密度達到4×106/ml，以3-5×105/ml 的密度進行傳代，接種至含2/3 CHO無血清培養基和1/3原培養基中培養。 3. 當細胞密度達到4×106/ml，以3-5×105/ml個活細胞密度進行傳代，接種至含100%CHO無血清培養基中培養。 4. 使用100% CHO無血清完全培養基繼續傳代幾次后，活細胞數應超過4×106/mL，培養4-6天存活率≥90%，此時被認為培養基適應已經完成。 瞬時轉染： 1. 在瞬轉開始之前，細胞應完全適應CHO無血清培養基，CHO細胞生長狀態正常，傳代倍增時間穩定（一般20-24h），細胞活率維持95%以上，方可進行瞬轉測試。 2. 配置DNA-PEI 核酸-轉染試劑復合物(DNA：1.5mg/L，PEI：7.5mg/L），室溫孵育15-20min。 3. 轉染時調整活細胞密度為6 x106 cells/ml（離心去掉舊培養液，改用新培養基最佳），并在Day1加入1.5mM 丙戊酸鈉。轉染之后的整個培養過程中，應該密切注意細胞活率和密度，在Day1-3-5-7-9-11添加5%補料進行高密度高產量表達，葡萄糖按需添加。 4. 當細胞活率低于80%，培養結束，收取上清液，純化目標產物。 5. （培養過程中參數建議如下：初始培養溫度36.5℃，Day1溫度降低至32~33℃，pH:7.1±0.2，DO：40%。搖床轉速120rpm，振幅50mm, 5-8%CO2 ）。 |
| 注意事項 | 1. 液體細胞培養基應置于2～8℃避光保存。 2. 針對不同的細胞株，由于代謝或對營養物質的需求不同，需要針對性的優化補料量，以更好的提高表達量。 |
| 聲明 | 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。 |
| 保存條件 | 2-8℃避光儲存，有效期12個月。 |
