適用范圍 | 試劑 |
---|---|
使用方法 | HEK293 細(xì)胞在略微偏酸性的環(huán)境下生長狀態(tài)較好,可順利貼壁生長,在細(xì)胞換液時(shí),注意動(dòng)作輕盈,避免細(xì)胞脫落。傳代之前將培養(yǎng)基置于水浴鍋中預(yù)熱至少 30min。 細(xì)胞傳代(以 T25 為例): 1. 將細(xì)胞以 0.5×105cells/mL 接種,37℃,5%-8%的 CO2 培養(yǎng) 2 天后在顯微鏡中觀察細(xì)胞密度,若細(xì)胞密度大于 80%,即可按比例或細(xì)胞密度接種(復(fù)蘇后首次傳代建議按 1:2 傳代);若細(xì)胞密度低于 70%,可以繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞密度至 80%以上后傳代。 2. 盡量吸取干凈培養(yǎng)瓶中的原培養(yǎng)基,并加入 3-5 mL PBS 溶液輕輕潤洗細(xì)胞,潤洗完成后去掉 PBS。 3. 在培養(yǎng)瓶瓶中加入 1mL 消化胰酶并鋪勻至瓶底部細(xì)胞層,置于 37℃培養(yǎng)箱中孵育消化2 min。 4. 加入新鮮貼壁培養(yǎng)基終止消化,并用移液器輕輕沿瓶底吹打細(xì)胞,將懸浮細(xì)胞移至離心管中,200g,離心 5 min,棄上清。 5. 用新鮮培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞至 0.5×105 cells/mL,并轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。 細(xì)胞凍存: 1. 準(zhǔn)備細(xì)胞凍存液:取 90%終體積的新鮮培養(yǎng)基于離心管中,加入10%的DMSO,混合均勻;也可用商品化細(xì)胞凍存液。 2. 先將細(xì)胞按傳代步驟進(jìn)行消化、離心、棄上清,獲得細(xì)胞沉淀。 3. 并加入適量預(yù)先制備的細(xì)胞凍存液,稀釋細(xì)胞至1.0×106 cells/mL,使細(xì)胞完全重懸,將細(xì)胞分裝至凍存管中。 4. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80℃冰箱過夜。 5. 將程序降溫盒中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至液氮罐中保存。 |
注意事項(xiàng) | 1. 培養(yǎng)基應(yīng)置于2~8℃避光保存,避免反復(fù)凍融。 2. 培養(yǎng)基在使用前需在 37℃水浴鍋中進(jìn)行預(yù)熱。 3. 培養(yǎng)瓶在轉(zhuǎn)移過程中避免劇烈搖晃。 4. 本產(chǎn)品使用過程中應(yīng)注意無菌操作,避免污染。 5. 試劑包裝如有破損或滴漏,嚴(yán)禁使用。 |
聲明 | 僅用于科研使用,不能用于臨床診斷和治療。 |
保存條件 | 2-8℃避光保存,有效期12個(gè)月 |