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成脂誘導分化+染色試劑盒

產(chǎn)品貨號S1023-KIT
產(chǎn)品規(guī)格Kit
目錄價格 ￥3000.00 元
產(chǎn)品編號S1023-KIT
百迪全線產(chǎn)品僅供科研使用
產(chǎn)品信息
適用范圍 試劑
使用方法 1. 試劑配制：
完全誘導培養(yǎng)基B：2-8℃過夜融化成脂誘導添加物B，使用前須37℃復溫30分鐘至內(nèi)容物充分解凍為透明無沉淀。將人間充質(zhì)干細胞成脂誘導基礎(chǔ)培養(yǎng)基平均分成2份，各45ml，加入成脂誘導添加物B配制成完全誘導培養(yǎng)基B，充分混勻。
完全誘導培養(yǎng)基C：2-8℃過夜融化成脂誘導添加物C，加入人間充質(zhì)干細胞成脂誘導基礎(chǔ)培養(yǎng)基的另一份45 ml，配制成完全誘導培養(yǎng)基C，充分混勻，2-8 ℃保存。
油紅O染液（工作液）：取油紅O儲液，與蒸餾水以3：2的比例混合均勻，中性濾紙過濾，即配制成了油紅O染液（工作液），油紅O染色工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。
2. 培養(yǎng)皿處理：加適量室溫復溫的包被溶液到培養(yǎng)器皿中，輕輕搖動使其覆蓋整個培養(yǎng)器皿底面，室溫靜置30-60分鐘。棄去溶液，室溫晾干。
3. 準備所需誘導分化的MSC，當細胞融合達85%左右時，用消化液消化細胞，并用MSC完全培養(yǎng)基重懸。
4. 按照3×104 cells/cm2的密度將細胞接種于已包被處理的六孔板中，每孔MSC完全培養(yǎng)基（需自備）2 ml，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（細胞密度可根據(jù)實驗室情況進行調(diào)整）。
5. 當細胞融合達90%時，棄去培養(yǎng)上清，每孔添加完全誘導培養(yǎng)基B 2 ml/孔，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
6. 誘導培養(yǎng)72小時后棄去原培養(yǎng)上清，添加完全誘導培養(yǎng)基C 2 ml/孔，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
7. 繼續(xù)誘導培養(yǎng)24小時后棄去原培養(yǎng)基，添加完全誘導培養(yǎng)基B 2 ml/孔，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
8. 重復步驟6、7約3-5次，待細胞內(nèi)出現(xiàn)明顯脂滴時更換為完全誘導培養(yǎng)基C繼續(xù)培養(yǎng)（一般骨髓間充質(zhì)干細胞在培養(yǎng)4天左右高倍鏡下能看到細胞漿內(nèi)有較多數(shù)量的圓形亮泡，5-9天融合為較大的亮泡，這些結(jié)構(gòu)圍繞在細胞核周圍，較大的與細胞核大小相當。狀態(tài)較好的細胞10天內(nèi)可結(jié)束培養(yǎng)過程，若10天后仍未見脂滴結(jié)構(gòu)，請注意分析操作步驟與其他原因。臍帶等組織來源的細胞時間可能不同，需根據(jù)具體情況判斷）。
9. 每2天更換新鮮完全誘導培養(yǎng)基C，繼續(xù)培養(yǎng)至脂滴足夠大時培養(yǎng)結(jié)束（根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)結(jié)束時間，若成脂面積過大或脂滴過大導致連成片則不利于結(jié)果的呈現(xiàn)，建議提前終止。誘導終止時間以脂滴大小或擬定的對照時間為準，一般最長不超過40天）。
10. 誘導培養(yǎng)結(jié)束時，棄去培養(yǎng)上清，DPBS洗細胞兩次，4%中性多聚甲醛溶液2ml/孔室溫固定細胞20分鐘（培養(yǎng)結(jié)束時或中途也可以選擇其他檢測方法，如基因表達檢測等）。
11. 棄去固定液，DPBS洗2次，加入油紅O染液（工作液）1ml/孔染色15分鐘。該步驟適用于鑒定成脂能力，若出現(xiàn)脂滴（脂肪細胞）則會呈現(xiàn)紅色著色。染色時間需實際情況確定。
12. 棄去油紅O染液（工作液），DPBS洗3次，添加新鮮DPBS。
13. 顯微鏡下觀察并拍照。
14. 結(jié)果判定：按照程序操作完畢，低倍鏡下觀察可見大面積紅色著色點，20倍和40倍鏡下可觀察到紅色球形在細胞內(nèi)的情況，此紅色著色球為脂滴，說明實驗所用的MSC具有成脂能力。否則，所使用的MSC無成脂能力。
注意事項 1. 成脂誘導后細胞易脫壁，換液時完全培養(yǎng)基必須經(jīng)室溫復溫 30 分鐘。添加培養(yǎng)基時動作要輕柔，沿培養(yǎng)器皿側(cè)壁緩緩加入，避免吹起細胞。
2. 細胞起始誘導時，融合度對誘導效果十分關(guān)鍵，必須確保細胞生長至足夠密時再進行誘導。
3. 換液時誘導液必須經(jīng)過復溫，否則影響誘導效果和可能導致細胞脫壁。
4. 染色工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。
5. 染色過程中一定要避免組織細胞被風干，風干會影響顯微觀察效果。
6. 如果試劑外包裝管出現(xiàn)裂縫，應(yīng)立即停止使用。
7. 應(yīng)嚴格按照貯存要求貯存，避免反復凍融。
8. 操作過程應(yīng)在無菌環(huán)境下進行，必須保證操作過程中使用的所有容器及所有直接接觸細胞液的器具嚴格無菌。
聲明 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。
保存條件
產(chǎn)品詳情

間充質(zhì)干細胞（MSC）具有多向分化的潛能，在一定條件下可以體外誘導分化為脂肪細胞、 成骨細胞、成軟骨細胞，是 MSC 鑒定的必檢項目，在多種組織來源和制作方法的 MSC 藥品 質(zhì)量控制中，成骨、成脂、成軟骨也是必檢指標。BDBIO 成脂誘導分化染色試劑盒可用于鑒 定人 MSC 是否具有成脂分化能力，滿足 MSC 質(zhì)量控制的要求，此外培養(yǎng)基還可用于研究誘 導分化過程中的其他檢測，如 mRNA 檢測、lncRNA 檢測、microRNA 檢測、蛋白表達檢測、 油脂定量檢測、免疫組化檢測等。本產(chǎn)品誘導 MSC 分化為的脂肪細胞多為多泡脂肪細胞樣， 當脂肪滴融合過大時容易脫壁，難見單泡脂肪細胞樣，用于脂肪研究可斟酌使用本產(chǎn)品。