| 適用范圍 | 試劑 |
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| 使用方法 | 人多能干細胞培養基制備： 1. 將 Advance 人多能干細胞基礎培養基提前恢復至室溫，添加劑解凍后翻轉混勻。 2. 然后將 100ml 添加劑無菌轉移到 400ml Advance 人多能干細胞基礎培養基，混勻得到完全培養基。 3. 配制好的完全培養基可在 2°C-8°C 下儲存 2 周。 人多能干細胞復蘇： 1. 提前用基質膠包被 6 孔板，每孔內加入 1ml 基質膠輕輕晃動使其完全覆蓋皿底，置于 37℃ 培養箱中孵育1h~2h，實驗前拿出并置于生物安全柜中室溫下平衡 20 min。 2. 將 Advance 多能干細胞完全培養基提前預熱，取 5~10ml 加入 15ml 離心管中備用。 3. 將凍存的多能干細胞從液氮中取出，37°C 水浴中快速融化，當只剩下一塊小冰晶時，將凍存管從水浴中取出，噴灑 70%的乙醇，然后放在生物安全柜中。 4. 將解凍的細胞轉移到提前備好的含完全培養基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 3min。 5. 丟棄上清液，并將細胞沉淀重懸于 2ml 完全培養基混勻，將細胞懸液緩慢添加到基質膠包被的 6 孔板中，6 孔板的每個孔接種密度約 100 萬個活細胞。 6. 輕輕晃動 6 孔板使細胞均勻分布，置于 37℃，5%CO2 培養箱培養。 7. 第 2 天觀察細胞貼壁情況，更換新鮮培養基，此后每天更換培養基，直到細胞長至約 85% 匯合度。 人多能干細胞傳代： 1. 將 Advance 人多能干細胞培養基及消化液提前預熱。 2. 棄掉原有培養基，貼壁緩慢加入 DPBS 清洗，然后沿培養皿邊緣吸去 DPBS 緩沖液。 3. 每孔加入 1-2ml 人多能干細胞消化液使之覆蓋皿底，并置于室溫孵育 5-8min 或在 37°C下孵育 4-5min（消化時間依據干細胞生長密度，消化時間略有不同，消化過程中可在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若在顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣以及克隆內部細胞間出現間隙，即可吸掉消化液終止消化）。 4. 將消化液吸掉后，加入 2ml Advance 人多能干細胞培養基，用移液槍輕柔吹打 3~5 次，使皿底干細胞集落脫落，并將其并轉移到 15mL 離心管中，少量殘余的細胞集落沒有脫落屬于正常現象。 5. 添加適當體積的預熱完全培養基到基質膠包被的 6 孔板中，將細胞懸浮液混勻后按一定比例接種至孔板中，輕輕晃動 6 孔板使細胞均勻分布，置于 37°C、5%CO2培養箱中培養過夜。 6. 第 2 天觀察細胞貼壁情況，更換新鮮培養基，此后每天更換培養基，直到細胞長至約 85% 匯合度。 人多能干細胞凍存： 1. 將 Advance 人多能干細胞培養基及消化液提前預熱。 2. 棄掉原有培養基，貼壁緩慢加入 DPBS 清洗，然后沿培養皿邊緣吸去 DPBS 緩沖液。 3. 每孔加入 1-2ml 人多能干細胞消化液使之覆蓋皿底，并置于室溫孵育 5-8min，或在 37°C 下孵育 4-5min。 4. 將消化液吸掉后，加入 2ml Advance 人多能干細胞培養基，用移液槍輕柔吹打 3~5 次，使皿底干細胞集落脫落，并將其并轉移到 15ml 離心管中，1000rpm 離心 3min。 5. 棄上清，加入無血清干細胞凍存液重懸，輕輕吹打混勻，轉入到凍存管中。 6. -80℃冰箱凍存過夜后轉入液氮中長期保存。 |
| 注意事項 | 1. Advance 人多能干細胞培養基添加劑在室溫或 2-8℃解凍，避免反復凍融。 2. 配制好的 Advance 人多能干細胞完全培養基可在 2°C-8°C 下儲存 2 周。 3. 傳代后可見細胞碎片和小菌落是正常現象。 4. 使用本產品時應嚴格按照無菌操作的規程進行操作。 |
| 聲明 | 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。 |
| 保存條件 |
