適用范圍 | 試劑 |
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使用方法 | 以下轉(zhuǎn)染的方法(以 siRNA 為例)已經(jīng)充分的驗(yàn)證過(guò),此試劑具有高效的轉(zhuǎn)染效率,但針對(duì)
每種細(xì)胞,還是建議實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行條件優(yōu)化后展開(kāi)實(shí)驗(yàn)。
一、細(xì)胞準(zhǔn)備 1. 根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)速度,提前一天鋪板,使細(xì)胞密度在轉(zhuǎn)染當(dāng)天達(dá)到 60%-80%即可。 二、配置轉(zhuǎn)染復(fù)合物 1. 根據(jù)說(shuō)明書(shū),在 Opti-MEM Medium 中稀釋 siRNA 和轉(zhuǎn)染試劑。 2. 按照 1:1 的比例將稀釋后的 siRNA 加入到稀釋后的轉(zhuǎn)染試劑中,室溫孵育 5min。 三、細(xì)胞轉(zhuǎn)染 1. 根據(jù)說(shuō)明書(shū),將 siRNA-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物加入到細(xì)胞板中。 2. 將細(xì)胞板置于 37℃,5%CO2 培養(yǎng)箱,培養(yǎng) 24-72h,直至進(jìn)行轉(zhuǎn)基因表達(dá)分析。 (反向轉(zhuǎn)染比正向轉(zhuǎn)染更快,是高通量轉(zhuǎn)染的首選方法。反向轉(zhuǎn)染的方法是在孔內(nèi)制備 復(fù)合物,然后加入細(xì)胞和培養(yǎng)基。由于細(xì)胞和 siRNA-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物是在同一天制備的, 我們建議使用比常規(guī)轉(zhuǎn)染方法多 2.5 倍的細(xì)胞。) |
注意事項(xiàng) | 1. 4 度保存,不可冷凍。避免反復(fù)或長(zhǎng)時(shí)間開(kāi)蓋,防止脂質(zhì)體氧化而影響轉(zhuǎn)染效率。 2. 轉(zhuǎn)染試劑不宜在室溫放置過(guò)久,因此在制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物前從冰箱拿出,加完后應(yīng)立即放 回 4℃再進(jìn)行后續(xù)操作。 3. 轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備完成后室溫孵育時(shí)間不得超過(guò) 20min,因此建議將細(xì)胞鋪好板后十字混 勻,暫放于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi),再進(jìn)行轉(zhuǎn)染復(fù)合物的制備。 4. siRNA 應(yīng)于-80℃保存。 5. 本產(chǎn)品使用過(guò)程中應(yīng)注意無(wú)菌操作,避免污染。 6. 試劑包裝如有破損或滴漏,嚴(yán)禁使用。 7. 操作人員萬(wàn)一與皮膚、粘膜接觸,請(qǐng)立即用清水清洗。 8. 禁止使用超出規(guī)定有效期的產(chǎn)品。 |
聲明 | 僅用于科研使用,不能用于臨床診斷和治療。 |
保存條件 | 2-8℃儲(chǔ)存,有效期24個(gè)月。 |