適用范圍 | 試劑 |
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使用方法 | 一、組織樣本預處理 1. 使用鑷子去除腸道外部的腸系膜、血管和脂肪,將腸段放入10cm培養皿中,培養皿置于冰盒上,加入2mL預冷DPBS-PS(DPBS溶液中加入1% PS),使用DPBS-PS 輕輕沖洗腸段。用剪刀將腸段縱向切開,腸腔朝上打開,使用預冷DPBS-PS反復輕輕洗滌腸段至清洗液澄清。 *如新鮮標本無法立即處理,組織標本應浸泡在組織保存液中,建議使用組織運輸保存液,冰上運輸盡快處理。 2. 準備裝有15mL預冷DPBS-PS的50mL離心管,用鑷子夾住腸段一端,懸掛于離心管口,將腸段剪成2-5mm小段,使腸段落入管內液體中。 3. 使用10mL移液管輕輕上下吹打腸道片段三次,靜置后輕輕吸出上清液,加入15mL預冷DPBS-PS。重復上述步驟15-20次,直至上清液澄清。 二、樣本消化 1. 消化液配制:準備24.9mL DPBS-PS,加入100μL 腸類器官組織消化液(250X),現配現用。 2. 清洗后的組織200g,離心3min,棄上清,向組織沉淀中加入腸類器官組織消化液25mL(1X),搖床室溫消化15-20 min,取部分于顯微鏡下觀察腸隱窩情況。(該步驟的消化時間可能會根據標本的情況進行調整) 3. 加入4mL DPBS-PS終止消化,200g,離心3 min,棄上清,加入DPBS-PS重懸。 三、收集細胞 1. 準備一支裝有70μm濾網的50mL潔凈離心管,使用移液管將混懸液通過70μm濾網過濾(可適當傾斜或輕微碰撞過濾器,使其快速過濾),以去除多余的絨毛,收集濾液。丟棄濾網并將濾液放置于冰上,標記為“餾分1”。重復上述步驟,將組織片段重懸于10mL預冷DPBS-PS中,濾網過濾后獲得餾分2-4,放置于冰上。 2. 在2-8℃下將各餾分290g,離心5min,棄上清液,將沉淀保留在每個管中。將各試管中的沉淀重懸于10mL預冷DPBS-PS中,分別轉移到干凈的15mL離心管中,并標記對應的餾分序號,在2-8℃下200g,離心3min,棄上清,保留腸隱窩沉淀。 |
注意事項 | 1. 本產品使用過程中應注意無菌操作,避免污染。 2. 試劑包裝如有破損或滴漏,嚴禁使用。 3. 為保持本產品的最佳使用效果,請勿進行反復凍融處理; 4. 不同組織使用本產品的消化狀態會有差異,根據標本的具體情況進行調整。 |
聲明 | 僅用于科研使用,不能用于臨床診斷和治療。 |
保存條件 | 2-8℃保存,有效期12個月。 |