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小鼠腎類器官完全培養(yǎng)基

產(chǎn)品貨號3D332-100
產(chǎn)品規(guī)格100ml
目錄價格 ￥5016.00 元
產(chǎn)品編號3D332-100
百迪全線產(chǎn)品僅供科研使用
產(chǎn)品信息
適用范圍 試劑
使用方法 小鼠腎類器官完全培養(yǎng)基制備：
1. 試劑準備：提前將小鼠腎類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基和小鼠腎類器官添加物從-20℃取出，冰上放 至融化。
2. 完全培養(yǎng)基配制：將小鼠腎類器官培養(yǎng)基添加物全部轉(zhuǎn)移到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，混合均勻，即 為小鼠腎類器官完全培養(yǎng)基。
3. 原代標本培養(yǎng)：取 10mL 配置好的完全培養(yǎng)基，加入 100μL Primary Enhancer，即可使 用。
4. 維持培養(yǎng)：對于非原代標本的培養(yǎng)，使用小鼠腎類器官完全培養(yǎng)基即可。
小鼠來源腎類器官構(gòu)建：
1. 樣本處理：將組織標本轉(zhuǎn)移到10cm培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿置于冰盒上，加入10mL DPBS-PS， 清除多余組織。
*如新鮮標本無法立即處理，組織標本應(yīng)浸泡在組織保存液中，建議使用組織運輸保存液， 冰上運輸盡快處理。
2. 樣本清洗：將標本使用DPBS-PS進行清洗，反復涮洗約5-10次，涮洗至清洗液澄清，去 除清洗液。
3. 消化前樣本準備：清洗完成后加入組織消化液Ⅰ約200 μL。將標本剪切至0.5-1 mm3的 大小，將切碎的組織轉(zhuǎn)移至15 mL的離心管（用抗粘附液預(yù)先潤濕）中。
4. 消化階段Ⅰ：加入4 mL 組織消化液Ⅰ，37℃搖床消化30-40 min，每隔15min觀察是否 有大量的細胞漏出，該步驟的消化時間可能會根據(jù)標本的情況進行調(diào)整。當有細胞大量漏 出，且組織塊中大部分細胞已經(jīng)被消化出來時，即可終止消化階段Ⅰ。
5. 終止消化階段Ⅰ：加入8mL DPBS-PS終止消化，300 g，離心5 min，棄上清。
6. 消化階段Ⅱ：加入2 mL 組織消化液Ⅱ，37℃，搖床消化10-15 min。鏡下觀察到大部分 細胞呈細胞團塊（＜200μm）既可終止消化階段Ⅱ（注：不要消化到單細胞狀態(tài)）。
7. 終止消化階段Ⅱ：加入8mL DPBS-PS終止消化，300 g，離心5 min，棄上清。
8. 收集細胞：加入10mL DPBS-PS對細胞進行重懸，使用2 mL 抗粘附液預(yù)先濕潤一個100 μm的細胞篩網(wǎng)，將細胞懸液使用該細胞篩網(wǎng)過濾，將濾出的濾液進行離心，300 g，5 min，棄上清。
9. （可選步驟）如含較多紅細胞（細胞沉淀呈現(xiàn)紅色），加入紅細胞裂解液進行裂紅（具體 實驗方法參考產(chǎn)品說明書）后，300 g，5 min，棄上清，使用1mL DPBS-PS重懸。
10.計數(shù)：通過自動細胞計數(shù)儀或者手動計數(shù)板計出細胞的個數(shù)。計數(shù)后，300 g， 離心5 min，棄上清，收集細胞沉淀。
11.接種：將獲取的細胞沉淀，按照2-4*103細胞/μL的密度重懸于基質(zhì)膠（BME或Matrigel） 中（接種密度僅供參考，可按照實驗需求進行調(diào)整）。將基質(zhì)膠重懸后的細胞接種至37℃ 預(yù)熱的細胞培養(yǎng)板中，注意槍尖不要接種至培養(yǎng)板的底部，膠滴應(yīng)接種于培養(yǎng)孔的中心位 置，若是24孔板，則每孔可接種50μL。將接種好的培養(yǎng)板放置在37℃下靜置5 min后， 倒置培養(yǎng)板靜置25 min。
12.補液：使用移液槍沿著孔側(cè)壁向每個孔中輕輕地加入600μL于37℃預(yù)熱的類器官完全培養(yǎng) 基，請勿將培養(yǎng)基直接加到膠滴上。將1mL DPBS-PS均勻加至其它未接種液滴的孔中， 以保持培養(yǎng)時的濕度。
13.培養(yǎng)：將培養(yǎng)板的蓋子蓋上，并在37℃和5％CO2下進行培養(yǎng)。鏡下觀察類器官的培養(yǎng)情 況，適時進行換液或傳代（一般建議每2-3天進行全換液或半換液）。一般在接種3-4天 后，可觀測到類器官形成。
小鼠來源腎類器官傳代：
1. 傳代標準：在傳代前，確保大部分類器官的大小大于100μm。
2. 消化：將培養(yǎng)類器官的24孔板取出，用移液器去除培養(yǎng)基，每孔加入0.5mL TrypLE，使 用1 mL槍頭將膠滴吹散（可根據(jù)類器官量適量增加TrypLE的體積）。室溫消化5-8 min， 或37℃培養(yǎng)箱消化5 min（避免消化過度，影響類器官生長），顯微鏡下觀察類器官消化 情況，待大部分類器官消化至40-60μm大小時，即可加入2倍消化液體積的DPBS-PS終 止消化。
3. 收集類器官：將消化后的類器官懸液轉(zhuǎn)入離心管中（可用抗粘附液預(yù)先潤濕離心管），保 證培養(yǎng)孔中的類器官都被收集起來。300 g，離心5 min，去上清，收集類器官，使用 1mL DPBS-PS重懸。
4. 計數(shù)：通過自動細胞計數(shù)板或者手動計數(shù)板計出細胞的個數(shù)。計數(shù)后，300 g， 離心5 min，去上清，收集類器官。
5. 接種：將獲取的類器官沉淀，根據(jù)計數(shù)結(jié)果重懸于基質(zhì)膠（Matrigel）中，一個膠滴大約 需要200-500個細胞團（約2-5萬個細胞）。吸取50μL細胞懸液，并加入到提前預(yù)熱的24 孔板（提前預(yù)熱半小時）的中心部位。（不要將類器官接種到最外側(cè)的孔中。）將接種好 的培養(yǎng)板放置在37℃下靜置5 min后，倒置培養(yǎng)板靜置25 min，以待基質(zhì)膠倒置凝固。
6. 補液：使用移液槍沿著孔側(cè)壁向每個孔中輕輕地加入600μL于37℃預(yù)熱的類器官完全培養(yǎng) 基，請勿將培養(yǎng)基直接加到膠滴上。將1mL DPBS-PS均勻加至其它未接種液滴的孔中， 以保持培養(yǎng)時的濕度。
7. 培養(yǎng)：蓋上培養(yǎng)板板蓋，并在37℃和5％CO2下進行培養(yǎng)。每2-4天進行一次全換液，觀 察生長情況，并進行拍照記錄，直至下次傳代。
注：所有接觸類器官的移液管、槍頭等類器官培養(yǎng)耗材均需進行潤洗，以免在傳代過程中 出現(xiàn)樣本的流失，使用抗粘附液效果更佳。
小鼠來源腎類器官凍存：
1. 凍存標準：觀察類器官生長情況，當類器官活性良好，大部分類器官的大小大于100μm 時，即可進行凍存。
2. 消化：小心吸走培養(yǎng)孔中的培養(yǎng)基，每孔加入0.5 mL TrypLE，吹散膠滴，37℃培養(yǎng)箱， 孵育3 min，顯微鏡下觀察類器官消化情況，待類器官消化至40-60μm大小時，即可加入 2倍消化液體積的DPBS-PS終止消化。
3. 收集類器官：將消化后的類器官懸液轉(zhuǎn)入離心管中（可用抗粘附液預(yù)先潤濕離心管），保 證培養(yǎng)孔中的類器官都被收集起來。300 g，離心5min，棄上清；加入3 mL DPBS-PS重 懸細胞，300 g，離心5 min，棄上清，使用1mL DPBS-PS重懸。
4. 計數(shù)：通過自動細胞計數(shù)板或者手動計數(shù)板計出細胞的個數(shù)。計數(shù)后，300 g， 離心5 min，去上清，收集類器官。
5. 凍存：根據(jù)類器官計數(shù)結(jié)果，加入適量類器官凍存液重懸沉淀，混合均勻后分裝至標記好 的凍存管中，類器官每管凍存細胞量約為5*105個，每管1mL，若細胞量較多時應(yīng)注意分 管凍存；將凍存管置于程序降溫盒中，-80℃過夜保存（或進行梯度降溫，4℃放置 20min，-20℃放置2h，-80℃放置過夜），最后轉(zhuǎn)移至液氮罐。
注意事項 1. 本產(chǎn)品僅供科研使用，使用前請仔細閱讀本說明書。
2. 本產(chǎn)品僅適用于新鮮獲取或在組織保存液中保存 24 h 內(nèi)的新鮮標本。
3. 本產(chǎn)品培養(yǎng)結(jié)果會受到標本質(zhì)量、培養(yǎng)條件等因素影響，同時也受到技術(shù)員操作習慣、操 作環(huán)境以及當前細胞生物學技術(shù)局限性等限制，因此可能會存在培養(yǎng)失敗的情況。
4. 類器官完全培養(yǎng)基中不含有抗生素成分，請根據(jù)實驗需求自行添加。
5. 建議進行適當分裝，-20℃儲存，開封后，4℃保存使用，并于 2 周內(nèi)用完，避免反復凍 融。
聲明 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。
保存條件 小鼠腎類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基：-20°C，12 個月；4°C，3個月
小鼠腎類器官培養(yǎng)基添加物:-20°C，12 個月
產(chǎn)品詳情
BDBIO 小鼠腎類器官培養(yǎng)體系模擬了細胞體內(nèi)生長的微環(huán)境，適用于小鼠腎組織來源類器 官的構(gòu)建、維持培養(yǎng)及傳代擴增。同時，小鼠腎類器官完全培養(yǎng)基有助于促進腎臟的多種細 胞類型的分化及腎小管樣結(jié)構(gòu)的形成，對腎臟發(fā)育中輸尿管芽的形成有促進作用，從而提高 培養(yǎng)的成功率和小鼠腎類器官的生長速率。