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小鼠乳腺癌類器官完全培養(yǎng)基

產(chǎn)品貨號3D330-100
產(chǎn)品規(guī)格100ml
目錄價格 ￥5082.00 元
產(chǎn)品編號3D330-100
百迪全線產(chǎn)品僅供科研使用
產(chǎn)品信息
適用范圍 試劑
使用方法 小鼠乳腺癌類器官完全培養(yǎng)基制備：
1. 試劑準(zhǔn)備：提前將小鼠乳腺癌類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基和小鼠乳腺癌類器官添加物從-20℃取出， 冰上放至融化。
2. 完全培養(yǎng)基配制：將乳腺癌類器官培養(yǎng)基添加物全部轉(zhuǎn)移到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，混合均勻，即 為乳腺癌類器官完全培養(yǎng)基。
3. 原代標(biāo)本培養(yǎng)：取 10mL 配置好的完全培養(yǎng)基，加入 100μL Primary Enhancer，即可使 用。
4. 維持培養(yǎng)：對于非原代標(biāo)本的培養(yǎng)，使用小鼠乳腺癌類器官完全培養(yǎng)基即可。
小鼠來源的乳腺癌類器官構(gòu)建：
1. 將新鮮組織標(biāo)本置于標(biāo)本儲存管中（注：組織塊太大將影響組織運(yùn)輸保存液中營養(yǎng)物質(zhì)的 交換，影響標(biāo)本活性，需將組織標(biāo)本修剪至體積約為0.5 cm3），加入足量組織運(yùn)輸保存 液浸沒組織，于2-8°C運(yùn)輸，盡快運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理。
2. 樣本處理：將組織標(biāo)本轉(zhuǎn)移到10cm培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿置于冰盒上，加入10mL DPBS-PS， 清除多余組織，僅保留病灶。
3. 樣本清洗：將標(biāo)本使用DPBS-PS進(jìn)行清洗，反復(fù)涮洗約5-10次，涮洗至清洗液澄清，去 除清洗液。
4. 消化前樣本準(zhǔn)備：清洗完成后加入組織消化液Ⅰ約200μL。將標(biāo)本剪切至0.5-1mm3的大 小，將切碎的組織轉(zhuǎn)移至15mL的離心管（用抗粘附液預(yù)先潤濕）中。
5. 消化階段Ⅰ：加入4 mL組織消化液Ⅰ，37℃搖床消化30-40 min，每隔15min觀察是否 有大量的細(xì)胞漏出，該步驟的消化時間可能會根據(jù)標(biāo)本的情況進(jìn)行調(diào)整。當(dāng)有細(xì)胞大量漏 出，且組織塊中大部分細(xì)胞已經(jīng)被消化出來時，即可終止消化階段Ⅰ。
6. 終止消化階段Ⅰ：加入8mL DPBS-PS終止消化，300g，離心5 min，棄上清。
7. 消化階段Ⅱ：加入2mL 組織消化液Ⅱ，37℃，搖床消化10-15 min。鏡下觀察到大部分 細(xì)胞呈細(xì)胞團(tuán)塊（＜200μm）既可終止消化階段Ⅱ（注：不要消化到單細(xì)胞狀態(tài)）。
8. 終止消化階段Ⅱ：加入8mL DPBS-PS終止消化，300g，離心5 min，棄上清。
9. 收集細(xì)胞：加入10mL DPBS-PS對細(xì)胞進(jìn)行重懸，使用2mL 抗粘附液預(yù)先濕潤一個100 μm的細(xì)胞篩網(wǎng)，將細(xì)胞懸液使用該細(xì)胞篩網(wǎng)過濾，將濾出的濾液進(jìn)行離心，300g，5 min，棄上清。
10.（可選步驟）如含較多紅細(xì)胞（細(xì)胞沉淀呈現(xiàn)紅色），加入紅細(xì)胞裂解液進(jìn)行裂紅（具體 實(shí)驗(yàn)方法參考產(chǎn)品說明書）后，300 g，5 min，棄上清，使用1 mL DPBS-PS重懸。
11.計數(shù)：通過自動細(xì)胞計數(shù)儀或者手動計數(shù)板計出細(xì)胞的個數(shù)。計數(shù)后，300g， 離心5 min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀。
12.接種：將獲取的細(xì)胞沉淀，按照2-4*103細(xì)胞/μL的密度重懸于基質(zhì)膠（BME或Matrigel） 中（接種密度僅供參考，可按照實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行調(diào)整）。將基質(zhì)膠重懸后的細(xì)胞接種至37℃ 預(yù)熱的細(xì)胞培養(yǎng)板中，注意槍尖不要接種至培養(yǎng)板的底部，膠滴應(yīng)接種于培養(yǎng)孔的中心位 置，若是24孔板，則每孔可接種50μL。將接種好的培養(yǎng)板放置在37℃下靜置5 min后， 倒置培養(yǎng)板靜置25 min。
13.補(bǔ)液：使用移液槍沿著孔側(cè)壁向每個孔中輕輕地加入600μL于37℃預(yù)熱的腫瘤類器官完全 培養(yǎng)基，請勿將培養(yǎng)基直接加到膠滴上。將1mL DPBS-PS均勻加至其它未接種液滴的孔 中，以保持培養(yǎng)時的濕度。
小鼠來源的乳腺癌類器官傳代：
1. 傳代標(biāo)準(zhǔn)：在傳代前，確保大部分類器官的大小大于 100μm。
2. 消化：將培養(yǎng)類器官的 24 孔板取出，用移液器去除培養(yǎng)基，每孔加入 0.5mL TrypLE， 使用 1 mL 槍頭將膠滴吹散（可根據(jù)類器官量適量增加 TrypLE 的體積）。室溫消化 5-8 min，或 37℃培養(yǎng)箱消化 5min（避免消化過度，影響類器官生長），顯微鏡下觀察類器 官消化情況，待大部分類器官消化至 40-60μm 大小時，即可加入 2 倍消化液體積的 DPBS-PS 終止消化。
3. 收集類器官：將消化后的類器官懸液轉(zhuǎn)入離心管中（可用抗粘附液預(yù)先潤濕離心管），保 證培養(yǎng)孔中的類器官都被收集起來。300g，離心 5 min，去上清，收集類器官，使用 1mL DPBS-PS 重懸。
4. 計數(shù)：通過自動細(xì)胞計數(shù)板或者手動計數(shù)板計出細(xì)胞的個數(shù)。計數(shù)后，300g，離心 5 min，去上清，收集類器官。
5. 接種：將獲取的類器官沉淀，根據(jù)計數(shù)結(jié)果重懸于基質(zhì)膠（Matrigel）中，一個膠滴大約 需要 200-500 個細(xì)胞團(tuán)（約 2-5 萬個細(xì)胞）。吸取 50μL 細(xì)胞懸液，并加入到提前預(yù)熱 的 24 孔板（提前預(yù)熱半小時）的中心部位。（不要將類器官接種到最外側(cè)的孔中。）將 接種好的培養(yǎng)板放置在 37℃下靜置 5min 后，倒置培養(yǎng)板靜置 25min，以待基質(zhì)膠倒置 凝固。
6. 補(bǔ)液：使用移液槍沿著孔側(cè)壁向每個孔中輕輕地加入 600μL 于 37℃預(yù)熱的腫瘤類器官完 全培養(yǎng)基，請勿將培養(yǎng)基直接加到膠滴上。將 1mL DPBS-PS 均勻加至其它未接種液滴的 孔中，以保持培養(yǎng)時的濕度。
7. 培養(yǎng)：蓋上培養(yǎng)板板蓋，并在 37℃和 5％CO2 下進(jìn)行培養(yǎng)。每 2-4 天進(jìn)行一次全換液， 觀察生長情況，并進(jìn)行拍照記錄，直至下次傳代。
注：所有接觸類器官的移液管、槍頭等類器官培養(yǎng)耗材均需進(jìn)行潤洗，以免在傳代過程中 出現(xiàn)樣本的流失，使用抗粘附液效果更佳。
小鼠來源的乳腺癌類器官凍存：
1. 凍存標(biāo)準(zhǔn)：觀察類器官生長情況，當(dāng)類器官活性良好，大部分類器官的大小大于 100μm 時，即可進(jìn)行凍存。
2. 消化：小心吸走培養(yǎng)孔中的培養(yǎng)基，每孔加入 0.5mL TrypLE，吹散膠滴，37℃培養(yǎng)箱， 孵育 3min，顯微鏡下觀察類器官消化情況，待類器官消化至 40-60μm 大小時，即可加 入 2 倍消化液體積的 DPBS-PS 終止消化。
3. 收集類器官：將消化后的類器官懸液轉(zhuǎn)入離心管中（可用抗粘附液預(yù)先潤濕離心管），保 證培養(yǎng)孔中的類器官都被收集起來。300g，離心 5min，棄上清；加入 3mL DPBS-PS 重 懸細(xì)胞，300g，離心 5 min，棄上清，使用 1mL DPBS-PS 重懸。
4. 計數(shù)：通過自動細(xì)胞計數(shù)板或者手動計數(shù)板計出細(xì)胞的個數(shù)。計數(shù)后，300g， 離心 5 min，去上清，收集類器官。
5. 凍存：根據(jù)類器官計數(shù)結(jié)果，加入適量類器官凍存液重懸沉淀，混合均勻后分裝至標(biāo)記好 的凍存管中，類器官每管凍存細(xì)胞量約為 5*105 個，每管 1mL，若細(xì)胞量較多時應(yīng)注意 分管凍存；將凍存管置于程序降溫盒中，-80℃過夜保存（或進(jìn)行梯度降溫，4℃放置 20min，-20℃放置 2h，-80℃放置過夜），最后轉(zhuǎn)移至液氮罐。
注意事項(xiàng) 1. 本產(chǎn)品僅供科研使用，使用前請仔細(xì)閱讀本說明書。
2. 本產(chǎn)品僅適用于經(jīng)細(xì)胞學(xué)或組織病理學(xué)確認(rèn)的實(shí)體瘤組織標(biāo)本或胸腹水的小鼠乳腺癌類器 官培養(yǎng)。
3. 本產(chǎn)品培養(yǎng)結(jié)果會受到標(biāo)本質(zhì)量、培養(yǎng)條件等因素影響，同時也受到技術(shù)員操作習(xí)慣、操 作環(huán)境以及當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)局限性等限制，因此可能會存在培養(yǎng)失敗的情況。
4. 類器官完全培養(yǎng)基中不含有抗生素成分，請根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求自行添加。
5. 建議進(jìn)行適當(dāng)分裝，-20℃儲存，開封后，4℃保存使用，并于 2 周內(nèi)用完，避免反復(fù)凍 融。
聲明 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。
保存條件 小鼠乳腺癌類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基：-20°C，12 個月；4°C，3個月
小鼠乳腺癌類器官培養(yǎng)基添加物:-20°C，12 個月
產(chǎn)品詳情
BDBIO 小鼠乳腺癌類器官培養(yǎng)體系含特有組分及豐富的細(xì)胞因子，模擬了腫瘤細(xì)胞在體內(nèi) 生長的微環(huán)境，能促使小鼠乳腺癌細(xì)胞迅速生長成并形成乳腺癌類器官，同時保持較高的來 源于體內(nèi)腫瘤組織細(xì)胞的特性和活力，保留個體之間的腫瘤異質(zhì)性，為后續(xù)基于小鼠乳腺癌 類器官的生理功能、疾病研究和精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)提供重要的模型工具。