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人子宮內(nèi)膜類器官完全培養(yǎng)基

產(chǎn)品貨號3D320-100
產(chǎn)品規(guī)格100ml
目錄價格 ￥5940.00 元
產(chǎn)品編號3D320-100
百迪全線產(chǎn)品僅供科研使用
產(chǎn)品信息
適用范圍 試劑
使用方法 人來源的子宮內(nèi)膜類器官完全培養(yǎng)基制備
1. 試劑準備：提前將人子宮內(nèi)膜類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基和人子宮內(nèi)膜類器官添加物從-20℃取出， 冰上放至融化。
2. 完全培養(yǎng)基配制：將人子宮內(nèi)膜類器官培養(yǎng)基添加物全部轉(zhuǎn)移到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，混合均勻。
3. 原代標本培養(yǎng)：取 10 mL 配置好的完全培養(yǎng)基，加入 100 μL Primary Enhancer，即可 使用。
4. 維持培養(yǎng)：對于非原代標本的培養(yǎng)，使用人子宮內(nèi)膜類器官完全培養(yǎng)基即可。
人來源的子宮內(nèi)膜類器官類器官構(gòu)建：
1. 將組織標本轉(zhuǎn)移到 3.5 cm 培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿置于冰盒上，加入 2 mL DPBS-PS，清除多 余組織。
2. 將標本使用 DPBS-PS 進行清洗，反復(fù)涮洗至清洗液澄清，約 5 - 10 次。去除清洗液，加 入組織消化液Ⅰ約 200 μL。
3. 清洗完成后將標本剪切至 0.5 - 1 mm3 的大小，將切碎的組織轉(zhuǎn)移至 15 mL 的離心管中， 加入 4 mL 組織消化液Ⅰ，37℃搖床消化 30 - 40 min，每隔 15 min 進行觀察是否有大 片的細胞漏出，該步驟的消化時間可能會根據(jù)標本的情況進行調(diào)整。
4. 消化液Ⅰ消化結(jié)束后，加入 8 mL DPBS-PS 終止消化，300 g，離心 5 min，棄上清。
5. 加入 2 mL 組織消化液Ⅱ，37℃，搖床消化 10 - 15 min。消化結(jié)束后，加入 4 mL DPBS-PS 終止消化，300 g，離心 5 min，收集細胞。
6. 棄上清，加入 2 mL DPBS-PS 對細胞進行重懸，使用 2 mL 抗粘附液預(yù)先濕潤一個 100 μm 的細胞篩網(wǎng)，將細胞懸液使用該細胞篩網(wǎng)過濾，將濾出的濾液進行離心，300 g，5 min。
7. （可選步驟）去上清，如含較多紅細胞（細胞沉淀呈現(xiàn)紅色），加入紅細胞裂解液進行裂 紅（具體實驗方法參考產(chǎn)品說明書）。
8. 細胞計數(shù)，通過自動細胞計數(shù)儀或者手動計數(shù)板計出細胞團的個數(shù)，按照 1-2*104
1. 細胞團/mL 的密度重懸于基質(zhì)膠（BME 或 Matrigel）中（接種密度僅供參考，可按照實 驗需求進行調(diào)整）。將基質(zhì)膠重懸后的細胞接種至 37℃預(yù)熱的細胞培養(yǎng)板中，注意槍尖 不要接種至培養(yǎng)板的底部，膠滴應(yīng)接種于培養(yǎng)孔的中心位置，若是 24 孔板，則每孔可接 種 50 μL。
9. 將接種好的培養(yǎng)板放置在 37℃下靜置 5 min 后，倒置培養(yǎng)板靜置 25 min，向每個孔中 輕輕地加入 500 μL 于 37℃預(yù)熱的人子宮內(nèi)膜類器官完全培養(yǎng)基。
10.將無菌 DPBS-PS 加至其它未接種液滴的孔中，以保持培養(yǎng)時的濕度，將培養(yǎng)板的蓋子蓋 上，并在 37℃和 5％CO2 下進行培養(yǎng)。
11.鏡下觀察類器官的培養(yǎng)情況，適時進行換液或傳代（一般建議每 2-3 天進行全換液或半換 液）。一般在接種 3-4 天后，可觀測到類器官形成，在傳代前，確保大部分類器官的大小 大于 100 μm。
人來源的子宮內(nèi)膜類器官傳代：
1. 將培養(yǎng)類器官的 24 孔板取出，用移液器去除培養(yǎng)基，加入 2 mL TrypLE，使用 1 mL 槍 頭將膠滴吹散（可根據(jù)類器官量適量增加 TrypLE 的體積）。室溫消化 5 – 8 min，或 37℃培養(yǎng)箱消化 5 min（避免消化過度，影響類器官生長）。
2. 將消化后的類器官懸液轉(zhuǎn)入 6 mL 預(yù)冷的 DPBS-PS 中，可潤洗培養(yǎng)孔（需回收），保證 培養(yǎng)孔中的類器官都被收集起來。300 g，離心 5min，去上清，收集類器官。
3. 細胞計數(shù)：將離心收集的細胞沉淀重懸于 1 mL DPBS-PS 中，通過自動細胞計數(shù)板或者 手動計數(shù)板計出細胞團的個數(shù)，一個膠滴大約需要 200 - 500 個細胞團（約 5 – 10 萬個 細胞）。計數(shù)后，300 g， 離心 5 min，去上清，收集類器官。
4. 將獲取的細胞沉淀根據(jù)計數(shù)結(jié)果重懸于基質(zhì)膠中。吸取 50 μL，并加入到提前預(yù)熱的 24 孔板（提前預(yù)熱半小時）的中心部位。（不要將類器官接種到最外側(cè)的孔中。）
5. 將接種好的培養(yǎng)板放置在 37℃下靜置 5 min 后，倒置培養(yǎng)板靜置 25 min，以待基質(zhì)膠 倒置凝固。
6. 使用移液槍沿著孔側(cè)壁向每個孔中輕輕地加入 500 μL 于 37℃預(yù)熱的類器官完全培養(yǎng)基， 請勿將培養(yǎng)基直接加到膠滴上。將適量 DPBS-PS 加至其它未接種液滴的孔中，以保持培 養(yǎng)時的濕度。
7. 蓋上培養(yǎng)板板蓋，并在 37℃和 5％CO2 下進行培養(yǎng)。并每 2 - 4 天進行一次培養(yǎng)基換液， 觀察生長情況，并進行拍照記錄，直至下次傳代。
人來源的子宮內(nèi)膜類器官凍存：
1. 觀察類器官生長情況，當類器官活性良好，每毫升活細胞數(shù)不低于 5*105 個時，即可進行 凍存，類器官每管凍存細胞量約為 5*105 個，若細胞量較多時應(yīng)注意分管凍存。
2. 小心吸走培養(yǎng)孔中的培養(yǎng)基，加入適量 TrypLE，吹散膠滴，37℃培養(yǎng)箱，孵育 3 min， 顯微鏡下觀察類器官消化情況，待類器官消化至 40-60 μm 大小時，即可加入 2-3 倍消 化液體積的 DPBS-PS 終止消化，300 g，離心 5 min，棄上清；加入 3 mL DPBS-PS 重 懸細胞，300 g，離心 5min，棄上清。
3. 加入類器官凍存液重懸沉淀，混合均勻后分裝至標記好的凍存管中，每管 1 mL；將凍存 管置于程序降溫盒中，進行梯度降溫：4℃（20 min），-20℃（2 h），-80℃（過夜）， 最后轉(zhuǎn)移至液氮罐。
注意事項 1. 本產(chǎn)品使用過程中應(yīng)注意無菌操作，避免污染。
2. 本產(chǎn)品僅適用于新鮮獲取或在組織保存液中保存 24h 內(nèi)的新鮮標本。
3. 本產(chǎn)品培養(yǎng)結(jié)果會受到標本質(zhì)量、培養(yǎng)條件等因素影響，同時也受到技術(shù)員操作習慣、操 作環(huán)境以及當前細胞生物學技術(shù)局限性等限制，因此可能會存在培養(yǎng)失敗的情況。
4. 類器官完全培養(yǎng)基中不含有抗生素成分，請根據(jù)實驗需求自行添加，推薦工作濃度為 1%。
5. 建議進行適當分裝，-20℃儲存，開封后，4℃保存使用，并于 2 周內(nèi)用完，避免反復(fù)凍 融。
聲明 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。
保存條件 人子宮內(nèi)膜類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基：-20°C，12 個月；4°C，3個月
人子宮內(nèi)膜類器官培養(yǎng)基添加物:-20°C，12 個月
產(chǎn)品詳情
人子宮內(nèi)膜類器官培養(yǎng)體系模擬了細胞體內(nèi)生長的微環(huán)境，可以從人子宮內(nèi)膜組織快速生成 子宮內(nèi)膜的祖細胞類器官，極大程度維持了來源于體內(nèi)子宮內(nèi)膜組織的特征。