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高濃度基質(zhì)膠

產(chǎn)品貨號3D204-010
產(chǎn)品規(guī)格10ml
目錄價格 ￥5800.00 元
產(chǎn)品編號3D204-010
百迪全線產(chǎn)品僅供科研使用
產(chǎn)品信息
適用范圍 試劑
使用方法 免疫抑制小鼠成瘤實驗：
1. 將 BDBIO 高濃度基質(zhì)膠置于冰中并在 4℃過夜融化，使用預(yù)冷的移液管或吸頭混合基質(zhì) 膠至均勻狀態(tài)。
2. 收集細胞懸液，調(diào)整細胞密度為 2x106 個/ml，置于冰上待用（收集的細胞宜在 1 小時內(nèi) 接種完畢）。
3. 將 BDBIO 細胞懸液與基質(zhì)膠按照 1:1 的比例混勻，通常 250μl 含有 2x106 個細胞/ml 的 冰預(yù)冷細胞懸液與 250μl 冰預(yù)冷的高濃度基質(zhì)膠混合（注射體積及細胞密度根據(jù)實際實 驗條件確定）。
4. 使用實驗動物電動剃毛器對小鼠注射部位皮膚進行脫毛，然后用酒精棉球進行消毒，用 1ml 注射器將細胞懸液與基質(zhì)膠混合液吸入注射器，進行皮下注射。
5. 注射完畢的小鼠繼續(xù)飼養(yǎng)約 1-3 周可觀察成瘤效果。
注：成瘤效果受細胞狀態(tài)，小鼠周齡大小，免疫排斥，接種部位等因素的影響，可能會導(dǎo)致 荷瘤不成功的情況。
薄膠成膠方法：
1. 將高濃度基質(zhì)膠置于冰上融化后，用預(yù)冷的移液槍頭混勻基質(zhì)膠成勻漿狀，可根據(jù)需要進 行稀釋后使用。
2. 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰上，加入濃度為 50μl/cm2 生長面積的基質(zhì)膠。
3. 在 37℃放置 30 分鐘，即可使用。
厚膠成膠方法：
1. 將高濃度基質(zhì)膠置于冰上融化后，用預(yù)冷的移液槍頭混勻基質(zhì)膠成勻漿狀，可根據(jù)需要進 行稀釋后使用。
2. 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰浴，將培養(yǎng)的細胞與基質(zhì)膠混合，用移液槍頭使其懸浮于基質(zhì) 中。加入濃度為 150-200μl/cm2 生長面積的基質(zhì)膠。
3. 在 37℃放置 30 分鐘，可成膠。可以加入細胞培養(yǎng)的基質(zhì)，也可使細胞直接生長在膠表面。
薄層包被方法：
1. 將高濃度基質(zhì)膠置于冰上融化后，用預(yù)冷的移液槍頭混勻基質(zhì)膠成勻漿狀。
2. 根據(jù)使用需要，采用無血清培養(yǎng)基稀釋基質(zhì)膠，根據(jù)實驗需要確定最佳包被濃度。
3. 將稀釋的基質(zhì)膠包被于所需的培養(yǎng)器皿中，包被量至少覆蓋整個器皿的生長表面。室溫下 孵育 1 小時。
4. 去除未結(jié)合的基質(zhì)膠，用無血清培養(yǎng)基輕輕地沖洗。
類器官培養(yǎng)方法：
1. 用適量的 4℃過夜解凍的高濃度基質(zhì)膠重懸細胞或組織沉淀（也可根據(jù)實驗條件進行稀釋 后使用），推薦重懸密度為每 50μl 基質(zhì)膠懸液包含 1×105 個細胞，重懸后可置于冰上， 重懸時間不超過 30s 以避免基質(zhì)膠過早凝固。基質(zhì)膠稀釋比例應(yīng)在 70%以上以保證培養(yǎng) 過程中基質(zhì)膠的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。
2. 將基質(zhì)膠和組織細胞的混合懸液點入預(yù)熱的 24 孔板底部正中央，每孔 30μl 左右，避免 懸液接觸孔板側(cè)壁。為防止基質(zhì)膠室溫凝固，此步驟應(yīng)盡快完成。
3. 將接種完成后的培養(yǎng)板至于 37℃二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱中，孵育 15min 左右待基質(zhì)膠凝固。
4. 待基質(zhì)膠完全凝固后，沿壁緩慢加入類器官培養(yǎng)基，24 孔板每孔 500ul，避免破壞已凝 固結(jié)構(gòu)。
5. 將 24 孔板置于 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
6. 每 3 天更換一次培養(yǎng)基，更換培養(yǎng)基時應(yīng)避免破壞基質(zhì)膠。
胚胎干細胞 ES 和誘導(dǎo)多能干細胞 iPS 培養(yǎng)：
1. 在冰上融化基質(zhì)膠，可根據(jù)實驗條件稀釋后使用。
2. 在 50ml 離心管中加入 24ml 的預(yù)冷的 DMEM/F-12，并且放在冰上。
3. 將解融的基質(zhì)膠按一定稀釋比例加入到預(yù)冷的 DMEM/F-12 中（在 50ml 離心管中）， 混勻。
4. 稀釋好的基質(zhì)膠溶液必須立即使用，進行培養(yǎng)皿的包被。
5. 輕輕晃動培養(yǎng)皿，將基質(zhì)膠溶液均勻的覆蓋到培養(yǎng)皿的表面。
1. 注意：如果培養(yǎng)皿的表面沒有被基質(zhì)膠溶液完全覆蓋，則不能用于人 ES 和 iPS 細胞培養(yǎng)。
6. 培養(yǎng)皿使用前至少在室溫（15-25°C）孵育 1 個小時，不可使基質(zhì)膠蒸發(fā)。
2. 注意：如果不是立即使用，包被好的培養(yǎng)皿必須密封防止基質(zhì)膠溶液的蒸發(fā)，包被后可以 在 2-8°C 放置一周。在使用之前，至少在室溫（15-25°C）中放置 30 分鐘恢復(fù)到室溫。
7. 輕輕的將培養(yǎng)皿的一側(cè)傾斜，使多余的基質(zhì)膠溶液在一側(cè)的邊緣匯聚。通過移液器或者泵 吸取多余的基質(zhì)膠溶液。確保包被的表面沒有被刮到。
8. 加入 ES 或 iPS 細胞置于 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注意事項 1. 收到產(chǎn)品并確認到貨情況無異常后，請將基質(zhì)膠儲存于-80℃冰箱，短暫使用可置于-20℃ 冰箱。切勿將基質(zhì)膠儲存于自動除霜的冰箱中。在第一次融化后請分裝保存，應(yīng)避免基質(zhì) 膠反復(fù)凍融。
2. 因基質(zhì)膠在 10℃以上即可成膠，在操作過程中，保持基質(zhì)膠一直置于冰上，所有接觸的 細胞培養(yǎng)器皿，移液吸頭，分裝管等都必須預(yù)冷后使用。
3. 所有操作均需在無菌環(huán)境下進行，試劑瓶瓶蓋可用 70％乙醇擦拭，并自然干燥。應(yīng)使用 預(yù)冷的移液器以保證基質(zhì)膠呈勻漿狀。
4. 本產(chǎn)品在實際使用過程中須根據(jù)實驗?zāi)康倪M行條件優(yōu)化。
聲明 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。
保存條件
產(chǎn)品詳情

基質(zhì)膠是從 Engelbreth-Holm-Swarm （EHS）(小鼠肉瘤提取的可溶性細胞培養(yǎng)基質(zhì)，含 有豐富的細胞外基質(zhì)蛋白，主要包括層粘連蛋白、膠原 IV、肝素硫酸酯蛋白聚糖、巢蛋白以 及大量的生長因子如 TGF-beta、EGF、IGF、FGF 及腫瘤自身含有的其他生長因子等。 BDBIO 高濃度基質(zhì)膠（16-26mg/ml）在室溫條件下，聚合形成具有生物學(xué)活性的三維基質(zhì)， 模擬體內(nèi)細胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能，有利于體外細胞的培養(yǎng)和分化，以及 對細胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達的研究，同時也適用于類器官生長、分化、 代謝和毒理學(xué)研究，動物體內(nèi)成瘤實驗等。