前言：實時無標記動態細胞分析技術（RTCA，Real Time Cellular Analysis）可以檢測貼壁細胞的電極阻抗，從而獲得細胞變化的參數，包括細胞生長、伸展、形態變化、死亡和貼壁等。人乳腺癌細胞MDA-MB-468為貼壁細胞，先接種癌細胞，待細胞到達對數期，添加NK細胞，監測癌細胞的信號變化，從而獲得NK細胞對癌細胞的殺傷效果。
實驗目的
監測NK細胞對實體瘤細胞的殺傷效果。
實驗材料
細胞及試劑
關鍵儀器設備
實驗步驟
細胞準備
人乳腺癌細胞MDA-MB-468培養一代后，收獲計數，按照每孔10000個接種至RTCA檢測耗材中，共接種10孔。
凍存的NK細胞（保存于-80℃，一周），37℃水浴復蘇，檢測數量與純度備用。
NK細胞殺傷
接種人乳腺癌細胞MDA-MB-468后，觀察細胞生長曲線，待曲線明顯升高時，分別接種不同效靶比的NK細胞，繼續監測。接種數量及效靶比如下：
實驗結果
NK細胞復蘇流式結果
RTCA cell index分析細胞殺傷
接種人乳腺癌細胞MDA-MB-468后，25h左右Cell Index曲線斜率相當，說明細胞在穩步增殖狀態，此時開始添加NK細胞，效靶比分別為1：1、4：1、8：1、16：1，對照組添加等量培養基，每孔有2個平行對照。
可以看到，對照組癌細胞繼續穩步增殖，于90h左右到達平臺期；效靶比1：1、4：1殺傷后癌細胞仍可增殖，殺傷效果不佳；效靶比為16：1時，癌細胞幾乎全部被殺死，將近70h+細胞無任何增殖。
細胞殺傷后的圖像對比
人乳腺癌細胞MDA-MB-468為貼壁生長，NK細胞懸浮或半貼壁生長，鏡下易成團，且NK細胞體積比癌細胞小。
通過鏡下觀察圖像可以看到，效靶比1：1組可看到細胞比較滿，效靶比4：1組細胞呈斑塊狀，一些區域完全沒有細胞。效靶比8：1組細胞細胞更少一些，只有少數區域長了細胞，大部分區域沒有細胞生長；而效靶比16：1組幾乎找不到癌細胞生長，可看到NK細胞結團。
實驗結論
NK細胞凍存復蘇后仍有很高的活率（98.8%）及很高的純度（95.3%）
通過RTCA實時無標記細胞分析技術，凍存復蘇NK細胞在效靶比為16：1時，對人乳腺癌細胞MDA-MB-468起到了非常好的殺傷效果。
相比于新鮮NK細胞的殺傷效果（效靶比4：1時細胞全部殺傷），凍存NK細胞的殺傷能力大幅降低。
